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土壤纤维素酶(S-CL)活性检测试剂盒说明书

土壤纤维素酶(S-CL)活性检测试剂盒

Soil Cellulase (S-CL) Activity Assay Kit

一、土壤纤维素酶(S-CL)活性检测试剂盒产品描述

土壤纤维素酶(S-CL)主要来源于土壤微生物,催化秸秆纤维中 β-1,4-葡萄糖苷键,使其转变为 纤维二糖和葡萄糖,产物为微生物可优先利用的碳源营养物质,在土壤碳素代谢中起着重要的作用。

土壤纤维素酶可催化纤维素降解产生还原糖,进一步与 3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基 化合物,产物在 540 nm 处具有特征吸收峰,通过吸光值的变化即可表征土壤纤维素酶的活性。 


二、土壤纤维素酶(S-CL)活性检测试剂盒产品内容

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三、土壤纤维素酶(S-CL)活性检测试剂盒产品说明

测定过程中所需要的仪器和试剂:可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、可调式移液器、恒温水 浴/培养箱、烘箱、30-50 目筛、甲苯和蒸馏水。

1. 土壤样本的处理

新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30-50 目筛。

2. 测定步骤

①分光光度计预热 30 min 以上,调节波长至 540 nm,蒸馏水调零。

②在离心管中依次加入下列试剂(可根据预实验结果适当调整样本量):

测定管振荡混匀,室温放置 15 min

对照管沸水浴处理 15 min(密封以防止水分散失)

振荡混匀,40℃水浴糖化 1 h,

沸水浴处理 15 min(密封以防止水分散失),即为糖化液

沸水浴显色 15 min(密封以防止水分散失),冷却至室温

吸光值测定:测定 540 nm 处吸光值,记为 A 测定、A 对照、A 标准和 A 空白;计算∆A 测定=A 测定-A 对照,∆A 标准=A 标准-A 空白。注:每个测定管均需设一个对照管,空白管只需测定 1-2 次。

标准曲线的建立:以 2.0、1.5、1.0、0.5、0.25、0.125 mg/mL 为横坐标(x),以其对应的∆A 标准 为纵坐标(y),绘制标准曲线,得到线性回归方程 y=kx+b,将∆A 测定带入公式中得到 x(mg/mL)。 

1. 土壤纤维素酶(S-CL)活性计算

单位定义:每天每 g 土样中产生 1 mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

注释:V 反总:反应体系总体积:1.625 mL;T:反应时间,1 h=1/24 d;W:样本质量,0.25 g。


四、土壤纤维素酶(S-CL)活性检测试剂盒产品注意事项

①若∆A 测定超出标准线性吸光值范围,超出最高值可将糖化液适当稀释后再进行测定,低于最 低值可适当延长糖化时间,计算时相应修改;

②为保证结果准确且避免试剂损失,测定前请仔细阅读说明书(以实际收到说明书内容为准), 确认试剂储存和准备是否充分,操作步骤是否清楚,且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定, 过程中问题请您及时与工作人员联系。



 


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