尿素氮含量检测试剂盒 Urea Nitrogen Content Assay Kit
一、尿素氮含量检测试剂盒产品描述 尿素氮(BUN)是人体蛋白质代谢的主要终末产物,构成了血液中绝大部分的非蛋白质氮。血清
尿素氮含量与肾小球功能密切相关,在一定程度上能够反映出肾小球的滤过功能,可作为衡量肾功能
的主要指标之一。
脲酶水解尿素产生的 NH3-N,在强碱性介质中能够与次氯酸盐和苯酚生成水溶性蓝色染料靛酚
蓝,产物在 630 nm 处具有特征吸收峰,通过吸光值变化即可定量检测尿素氮的含量。 二、产品内容附图 三、尿素氮含量检测试剂盒产品使用说明 测定过程中所需要的仪器和试剂:可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆
器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。 样品处理(可根据预实验结果适当调整样本量及比例)
①组织:按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为 1:(5-10)的比例(建议称取 0.1 g 组织,加
入 1 mL 蒸馏水)处理样品,冰浴匀浆,4℃ 12000 g 离心 15 min,取上清置于冰上待测。
②细菌或细胞:离心收集细菌或细胞至离心管内,按照细菌或细胞数量(104 个):蒸馏水体积(mL)
为(500-1000):1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1 mL 蒸馏水)处理样品,冰浴超声破碎(功
率 300 W,超声 3 s,间隔 7 s,总时间 3 min),4℃ 12000 g 离心 15 min,取上清置于冰上待测。
③血清(浆)、培养液等液体样本:直接检测或适当稀释后再进行检测。 2.测定步骤
①分光光度计/酶标仪预热 30 min,波长调至 630 nm,蒸馏水调零。
②在离心管中依次加入下列试剂 吸光值测定:吸取 200 μL 反应液于 96 孔板或微量玻璃比色皿中,测定 630 nm 处吸光值,记为
A 测定、A 对照、A 标准和 A 空白;计算∆A 测定=A 测定-A 对照,∆A 标准=A 标准-A 空白。注:空
白管只需测定 1-2 次,每个测定管均需设一个对照管。 标准曲线的建立:以 40、30、20、10、5、2.5 µg/mL 标准稀释液浓度为横坐标(x),以其对应的
∆A 标准为纵坐标(y),绘制标准曲线,得到标准方程 y=kx+b,将∆A 测定带入公式中得到 x(µg/mL)。 3.尿素氮含量计算
四、尿素氮含量检测试剂盒注意事项 ①若A测定超出标准吸光值线性范围:超出最高值建议将待测样本适当稀释后再进行测定;低于
最低值可适当增加样本量重新制备待测样本后再进行测定,计算时相应修改; ②显色完成后应在1 h内完成测定,测定管颜色应与标准管颜色一致(蓝色),若显色为黄色或绿
色,则表明NH3-N浓度过高,应将待测样本适当稀释后再进行测定,计算时相应修改; ③为保证结果准确且避免试剂损失,测定前请仔细阅读说明书(以实际收到说明书内容为准),
确认试剂储存和准备是否充分,操作步骤是否清楚,且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定,
过程中问题请您及时与工作人员联系。
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