黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒说明书 黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒
一、黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒产品描述 黄嘌呤氧化酶(XOD)是生物体内核酸代谢过程中的关键氧化还原酶类,可以利用分子氧作为电
子受体或亚甲基蓝、苯醌、高铁氰化物和硝酸盐等人工电子受体催化氧化黄嘌呤、蝶呤和醛类等多种
杂环化合物,并伴随产生过氧化氢和超氧自由基等活性氧,具有重要的生理和病理功能,在高尿酸血
症的诊断、活性氧生理作用和氧化应激损伤等研究领域具有重要作用。
黄嘌呤氧化酶能够催化黄嘌呤产生尿酸,产物在 290 nm 处具有特征吸收峰,通过吸光值变化即
可表征黄嘌呤氧化酶的活性。
二、黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒产品内容图示
三、黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒产品使用说明 测定过程中所需要的仪器和试剂:紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿(光径 10 mm)/96
孔 UV 板、研钵/匀浆器、可调式移液器/多道移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。 ①组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:(5-10)的比例(建议称取 0.1 g 组织,加
入 1 mL 提取液)处理样品,冰浴匀浆,4℃ 8000 g 离心 10 min,取上清置于冰上待测。 ②细菌或细胞:离心收集细菌或细胞至离心管内,按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)
为(500-1000):1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1 mL 提取液)处理样品,冰浴超声破碎(功
率 20%或 200 W,超声 3 s,间隔 10 s,重复 30 次),4℃ 8000 g 离心 10 min,取上清置于冰上待测。 ③血清(浆)、培养液等液体样本:直接检测或适当稀释后再进行检测。
黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒测定步骤: ①分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上,调节波长至 290 nm,蒸馏水调零。 ②根据使用量取出适量 XOD 工作液 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热 20 min 以上。 ③在微量石英比色皿/96 孔 UV 板中依次加入下列试剂: 吸光值测定:①立即混匀并开始计时,测定 290 nm 处初始吸光值,记为 A1 测定和 A1 空白;②
测定 60 s 时 290 nm 处吸光值,记为 A2 测定和 A2 空白;③计算∆A 测定=A2 测定-A1 测定,∆A 空
白=A2 空白-A1 空白,∆A=∆A 测定-∆A 空白。注:空白组只需测定 1-2 次。
黄嘌呤氧化酶(XOD)活性计算图示 黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒使用 96 孔 UV 板进行测定的计算公式图示: 注释:V 反总:反应体系总体积,2.1×10-4 L;ε:尿酸摩尔消光系数,1.22×104 L/mol/cm;d1:微
量石英比色皿光径,1 cm;d2:96 孔 UV 板光径,0.5 cm;V 样:反应体系中加入粗酶液的体积,0.01
mL;V 样总:粗酶液总体积,1 mL;T:反应时间,1 min;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓
度,mg/mL;细胞或细菌总数,以万计。
四、黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒注意事项 ①若 ΔA 测定大于 0.5 或 A1 测定大于 1.0 时,建议将粗酶液适当稀释后再进行测定,计算时相
应修改;
②若使用 96 孔 UV 板进行检测时应使用多道移液器且分批进行,以确保组间反应时间一致;
③为保证结果准确且避免试剂损失,测定前请仔细阅读说明书(以实际收到说明书内容为准)。
产品链接:http://www.shyx-bio.com/products-206.html 文章来源:http://www.shyx-bio.com/newss-140.html |