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氧化与抗氧化 - 黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒说明书

黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒说明书

黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒

黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒配图


一、黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒产品描述 

黄嘌呤氧化酶(XOD)是生物体内核酸代谢过程中的关键氧化还原酶类,可以利用分子氧作为电 子受体或亚甲基蓝、苯醌、高铁氰化物和硝酸盐等人工电子受体催化氧化黄嘌呤、蝶呤和醛类等多种 杂环化合物,并伴随产生过氧化氢和超氧自由基等活性氧,具有重要的生理和病理功能,在高尿酸血 症的诊断、活性氧生理作用和氧化应激损伤等研究领域具有重要作用。 黄嘌呤氧化酶能够催化黄嘌呤产生尿酸,产物在 290 nm 处具有特征吸收峰,通过吸光值变化即 可表征黄嘌呤氧化酶的活性。


二、黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒产品内容图示

黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒图1


三、黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒产品使用说明

测定过程中所需要的仪器和试剂:紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿(光径 10 mm)/96 孔 UV 板、研钵/匀浆器、可调式移液器/多道移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。

①组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:(5-10)的比例(建议称取 0.1 g 组织,加 入 1 mL 提取液)处理样品,冰浴匀浆,4℃ 8000 g 离心 10 min,取上清置于冰上待测。 

②细菌或细胞:离心收集细菌或细胞至离心管内,按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL) 为(500-1000):1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1 mL 提取液)处理样品,冰浴超声破碎(功 率 20%或 200 W,超声 3 s,间隔 10 s,重复 30 次),4℃ 8000 g 离心 10 min,取上清置于冰上待测。 

③血清(浆)、培养液等液体样本:直接检测或适当稀释后再进行检测。


黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒测定步骤:

①分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上,调节波长至 290 nm,蒸馏水调零。 

②根据使用量取出适量 XOD 工作液 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热 20 min 以上。 

③在微量石英比色皿/96 孔 UV 板中依次加入下列试剂:

吸光值测定:①立即混匀并开始计时,测定 290 nm 处初始吸光值,记为 A1 测定和 A1 空白;② 测定 60 s 时 290 nm 处吸光值,记为 A2 测定和 A2 空白;③计算∆A 测定=A2 测定-A1 测定,∆A 空 白=A2 空白-A1 空白,∆A=∆A 测定-∆A 空白。注:空白组只需测定 1-2 次。


黄嘌呤氧化酶(XOD)活性计算图示

黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒图2

黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒使用 96 孔 UV 板进行测定的计算公式图示:

黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒图3

注释:V 反总:反应体系总体积,2.1×10-4 L;ε:尿酸摩尔消光系数,1.22×104 L/mol/cm;d1:微 量石英比色皿光径,1 cm;d2:96 孔 UV 板光径,0.5 cm;V 样:反应体系中加入粗酶液的体积,0.01 mL;V 样总:粗酶液总体积,1 mL;T:反应时间,1 min;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓 度,mg/mL;细胞或细菌总数,以万计。


四、黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒注意事项

 ①若 ΔA 测定大于 0.5 或 A1 测定大于 1.0 时,建议将粗酶液适当稀释后再进行测定,计算时相 应修改; ②若使用 96 孔 UV 板进行检测时应使用多道移液器且分批进行,以确保组间反应时间一致; ③为保证结果准确且避免试剂损失,测定前请仔细阅读说明书(以实际收到说明书内容为准)。


产品链接:http://www.shyx-bio.com/products-206.html

文章来源:http://www.shyx-bio.com/newss-140.html

 



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