土壤酸性转化酶(S-AI)活性检测试剂盒 原鑫生物7月优惠价格¥399 一、土壤酸性转化酶(S-AI)活性检测试剂盒简介 土壤酸性转化酶(S-AI)作为催化蔗糖降解的重要酶类,能够在酸性条件下催化蔗糖分解为果糖 和葡萄糖,是土壤蔗糖代谢的关键酶之一,对增加土壤中可溶性营养物质起着重要作用,同时能够表 征土壤生物学活性强度,也可作为评价土壤熟化程度和肥力水平的参照指标。 土壤酸性转化酶能够催化蔗糖分解为葡萄糖和果糖,进一步与 3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红 色氨基化合物,产物在 540 nm 处具有特征吸收峰,通过吸光值变化即可表征土壤酸性转化酶的活性。
二、土壤酸性转化酶(S-AI)活性检测试剂盒产品内容
三、土壤酸性转化酶(S-AI)活性检测试剂盒产品说明 测定过程中所需要的仪器和试剂:可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、可调式移液器、台式离 心机、烘箱、30-50 目筛、恒温水浴/培养箱、甲苯和蒸馏水。 1.土壤样本的预处理 新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30-50 目筛。
2.测定步骤 ①分光光度计预热 30 min 以上,调节波长至 540 nm,蒸馏水调零。 ②在离心管中依次加入下列试剂(可根据预实验结果适当调整样本量): 试剂 测定管 (μL) 对照管 (μL) 标准管 (μL) 空白管 (μL) 风干土样(mg) 100 100 - - 标准稀释液 - - 800 - 试剂一 - 800 - 800 试剂二 800 - - - 甲苯 20 20 20 20 37℃反应 60 min,立即 95℃处理 10 min(密封以防止水分散失) 冰浴迅速冷却至室温,10000 rpm 常温离心 10 min,取上清 上清液 700 700 700 700 试剂三 300 300 300 300 充分混匀,95℃显色 10 min(密封以防止水分散失) 冰浴迅速冷却至室温。
3.吸光值测定:测定 540 nm 处吸光值,记为 A 测定、A 对照、A 标准和 A 空白;计算∆A 测定=A 测定-A 对照,∆A 标准=A 标准-A 空白。注:空白管只需测定 1-2 次,每个测定管均需设一个对照管。 标准曲线的建立:以 0.24、0.20、0.16、0.12、0.08、0.04 mg/mL 为横坐标(x),以其对应的 ΔA 标准为纵坐标(y),绘制标准曲线,得到线性回归方程 y=kx+b,将 ΔA 测定带入公式得到 x(mg/mL)。
4.土壤酸性转化酶(S-AI)活性计算 单位定义:37℃条件下,每 g 土壤每天催化生成 1 mg 还原糖定义为一个酶活力单位。 S-AI(U/g)= x×V2 W×T = 19.2×x W 注释:V2:反应体系中加入试剂二的体积,0.8 mL;W:风干土壤样本质量,g;T:反应时间: 60 min=1/24 d 。
四、土壤酸性转化酶(S-AI)活性检测试剂盒产品注意事项 ①若测定吸光值超出标准吸光值线性范围:高于标准上限值建议将上清液使用蒸馏水稀释或适当 减少样本量后再进行测定;低于标准下限值建议适当增加样本量或适当延长酶促反应时间后再进行测 定,计算时相应修改。 ②为保证结果准确且避免试剂损失,测定前请仔细阅读说明书(以实际收到说明书内容为准), 确认试剂储存和准备是否充分,操作步骤是否清楚,且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定。
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