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人狂犬病毒抗原ELISA试剂盒的使用方法如下：

1. 试剂准备：

• 将所有试剂和样本缓慢平衡至室温（18-25℃），避免直接在37℃下溶解。

• 标准品（冻干品）：每瓶标准品加入标准品稀释液1mL，室温静置约10分钟，反复颠倒以助溶解。准备7个稀释标准品的EP管，每个EP管中加入150μL的标准品稀释液，依次倍比稀释成不同的梯度。

• 浓洗涤液：用580mL蒸馏水或去离子水将20mL浓洗涤液稀释至600mL，进行30倍稀释。

2. 操作步骤：

• 样品准备：将待测样本按照说明书要求进行稀释，并加入到相应的反应孔中。

• 包被板处理：将预包被狂犬病毒抗原的微孔板取出，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次。

• 加入生物素标记物：向每个反应孔中加入适量的生物素标记的单克隆抗体，4℃过夜孵育。

• 洗涤：次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次。

• 加入HRP酶联物：向每个反应孔中加入HRP标记的酶联物，室温孵育30分钟。

• 再次洗涤：用洗涤缓冲液洗3次。

• 加入底物液：向每个反应孔中加入底物液A和底物液B，避光反应10-15分钟。

• 。

• 读数：在酶标仪上于450nm波长下测定吸光度（OD值），记录数据。

3. 结果计算：

• 根据标准曲线计算样本中狂犬病毒糖蛋白的浓度。

• 阴性判断、弱阳性判断和阳性判断均需参考试剂盒提供的标准曲线和Cut-off值。

4. 注意事项：

• 试剂盒需在4℃保存，开封后应在10天内使用完毕。

• 使用新鲜样本或-20℃保存样本以确保检测结果的准确性。

• 操作过程中需避免交叉污染，确保每一步的精确性。

注：原鑫生物这款人狂犬病毒抗原ELISA试剂盒基于竞争法原理，通过狂犬病毒糖蛋白与生物素标记的单克隆抗体的特异性反应，定量检测狂犬病毒灭活样本中的病毒糖蛋白成分，适用于科研领域。