超氧化物歧化酶(SOD)代测检测服务 测定原理 超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)普遍存在动、植物的体内,是一种清除超氧阴离子自由基的酶,它催化下面的反应:+o.-H2+HO 反应产物H2O2可由过氧化氢酶进一步分解或被过氧化物酶利用。超氧化物歧化酶抑制氮蓝四唑(NBT)在光下的还原作用来确定酶活性的大小。在有氧化物质存在下,核黄素可被光还原,被还原的核黄素在有氧条件下极易被氧化而产生超氧阴离子,超氧阴离子可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙,后者在560nm处有最大吸收。而SOD可清除超氧阴离子,从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后,反应液蓝色愈深,说明酶的活性愈低,反之酶的活性俞高。据此可计算出酶活性的大小。 测定方法:氮蓝四唑法 1.50mmol/lpH7.8的磷酸缓冲液(PBS)。含0.1mmol/lEDTA 2.220mmol/l甲硫氨酸:称3.2824g甲硫氨酸,用50mmol/lpH7.8的磷酸缓冲液定溶至100ml(现配现用)。 3.1.25mmol/l氯化硝基四氮唑蓝(NBT)溶液(现配):称NBT0.102g,用 50mmol/lpH7.8的磷酸缓冲液(PBS)溶解定容至100ml. 4.0.033mmol/l核黄素:称2.52mg用PBS溶解定容至200ml(遮光保存)
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