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生理生化检测 - γ-谷氨酰半胱氨酸衔接酶(GCL)检测代测服务

   γ-谷氨酰半胱氨酸衔接酶(GCL)

γ-谷氨酰半胱氨酸衔接酶(GCL)

    测定意义:

    GCL是GSH合成的限速酶,GSH对GCL有反应抑止作用。GCL基因表达受多种要素调理,如氧化剂、抗氧化剂、生长因子和炎症因子等。GCL活性上下对GSH含量和GSH/GSSG比值有重要影响。

    测定原理:

    在ATP和Mg2+存在下,GCL催化谷氨酸和半胱氨酸合成γ-谷氨酰半胱氨酸;同时ATP去磷酸化产生无机磷分子,经过测定无机磷增加速率,即可计算出GCL活性。

    GCL测定操作

    1.分光光度计预热30min,调理波长到660nm,蒸馏水调零。

    2.2.空白管:取1.5mLEp管,依次参加试剂一240µL、试剂二260µL、试剂三60µL和蒸馏水120µL,混匀后盖紧,37℃水浴精确反响15min;再参加试剂四300µL,混匀后,25℃、8000g,离心10min,取上清500µL,参加试剂五500µL,混匀后盖紧,45℃水浴10min,冷却后测定660nm处吸光值,记为A空白管。

    3.3.测定管:取1.5mLEp管,依次参加试剂一240µL、试剂二260µL、试剂三60µL和上清液120µL,混匀后盖紧,37℃水浴精确反响15min;再参加试剂四300µL,混匀后,25℃、8000g,离心10min,取上清500µL,参加试剂五500µL,混匀后盖紧,45℃水浴10min,冷却后测定660nm处吸光值,记为A测定管。

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