克伦特罗elisa试剂盒说明书（二） 
接着上一篇克伦特罗elisa试剂盒说明书（一）的相关对于试剂盒说明的简述，下面本章继续对克伦特罗试剂盒进行相关说明。
六、自备实验器材 1． 酶标仪 2． 高精度移液器及一次性吸头：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl 3． 洗板机 4． 37℃孵育箱 5． 超纯水，去离子水 6． 一次性稀释用聚丙烯试管
七、样本收集及储存
1. 尿液、血清、血浆样本不用处理，如果样本浑浊需过滤或3000g以上离心15min处理。 2. 组织样本处理：取捣碎样本5g，加入20ml，50mmolHCL振动1.5h，称取5g均质物，加入离心管，10000r/min离心15min。取上清至另一个离心管中，加1molNaOH 300ul，混合15min。加入4ml 500mmol KH2PO4(PH3.0),迅速混匀置于4℃冰箱保存1.5h。10000r/min离心15min，分离上清备用。 3. 饲料处理：用研钵研碎饲料样本，称取2.0±0.05g研碎的样本至50ml聚苯乙烯离心管中，加入2ml 1M 盐酸溶液，加入16ml去离子水用均质器进行均质；
用涡旋仪涡动3min，放振荡器上振荡15min；3000g以上，离心20min，转移出全部上清液至10ml聚苯乙烯离心管中，并加入2ml 1M氢氧化钠溶液混合均匀，检查pH值是否在6.5-7.5之间；（用盐酸或氢氧化钠溶液调节pH值）；3000g以上，离心20min，取100ml上清液至2ml干净的聚苯乙烯离心管中，加入900ml去离子水混合均匀。取50ul用于分析。 注意事项：如果样本中的靶标物检测浓度高 于标准品的最高值，请将样品做适当倍数稀释后检测，建议正式实验前做预实验以确定稀释倍数。 
八、试剂准备
1. 试剂回温：首先在实验前 30 min 将试剂盒，待测样本放置于室温下复温。 2. 配制洗涤液：预先计算好稀释后的洗涤液使用体积，然后用超纯水或去离子水将 20 倍浓缩洗涤液稀释 成 1 倍应用液，未用完的浓缩洗涤液放入 4℃冰箱保存。 3. 抗体工作液配制：抗体溶液与稀释液比例为1:9,例如向4.5ml抗体稀释液中加入500ul抗体溶液，混匀使用。 4. 标准品梯度稀释：标准品S6为即用型浓度为7290pg/ml，按照浓度为S5:2430pg/ml、S4:810pg/ml、S3:270pg/ml、S2:90pg/ml、S1:30pg/ml进行稀释，具体操作如下图所示。 
九、检测步骤
1 按照实验设计，在标准品与样本孔中加样50ul，加入50ul抗体工作液，再加入100ulHRP反应液，空白对照不加 2 37℃避光孵育45min 3 弃去液体，用洗涤液清洗4次，每次每孔至少加洗涤液300ul，洗完后吸水纸上拍干 4 每孔加入底物A、B各50ul，37℃避光孵育20min，显色浅可适当延长孵育时间 5 加入终止液50ul，10min内在450nm波长处测OD值
十、结果判断
1. 用酶标仪 450 nm 波长测定 OD 值。 2. 计算标准品、样品的平均 OD 值：每个标准品和标本的 OD 值应减去零孔的 OD 值 3. 以标准品浓度为横坐标，吸光度OD值为纵坐标，用软件绘制标准曲线，样品中克伦特罗含量可通过对应OD 值由标准曲线换算出相应的浓度。 4. 若标本 OD 值超出标准曲线范围，应做适当稀释后重新检测，计算浓度时再乘以稀释倍数。
十一、参数表征
1.数据及标准曲线
| Concentration(pg/ml) | OD1 | OD2 | 空白 | 0 | 0 | 0 | S1 | 30 | 1.278 | 1.298 | S2 | 90 | 1.174 | 1.183 | S3 | 270 | 1.091 | 1.102 | S4 | 810 | 0.884 | 0.892 | S5 | 2430 | 0.549 | 0.555 | S6 | 7290 | 0.272 | 0.276 |
2. 准确度：标准品线性回归与预期浓度相关系数R>0.95
4. 检测范围：30-7290pg/ml(如超出检测范围，需将样本稀释后检测) 5. 灵敏度：≤30pg/ml 4 特异性：不与其他可溶性结构类似物交叉反应 5 重复性：变异系数≤15% 6 储存条件：2-8℃冷藏 7 有效期：6个月
上海原鑫生物科技有限公司：ELISA试剂盒：多种属、1000多种指标：人、大小鼠、通用、牛、兔、山羊、仓鼠、猪、马、鸡、犬、豚鼠、猴、绵羊
抗体：兔多抗、鼠单抗品种丰厚，一抗1万余种，二抗100多种； 重组蛋白：多项创造专利，原核表达系统稳定表达蛋白1000余种。 在线联络：17621047120（周经理） QQ：2441609688 （任经理） 官方电话：400-788-2680 更多生化生理代测检测：http://www.shyx-bio.com/product-32-1-1.html |
400-788-2680
