本章简述人白细胞介素6ELISA试剂盒说明书,由于文章信息较大,所以在此对说明书进行分样发布,需要详细人白细胞介素6ELISA试剂盒说明书的可以致电原鑫生物科技获取或直接到官方网站进行下载。承接人白细胞介素6ELISA试剂盒说明书(一)的部分,本篇具体说明人白细胞介素6ELISA试剂盒需要自备的实验材料、样本手机和储存、试剂盒的准备以及检测步骤,供各位科研人员进行参考。
一.首先看看人白细胞介素6elisa试剂盒组成以及存储的知识 二. 再来看看人白细胞介素6ELISA试剂盒需要实验用的器材 1. 酶标仪 2. 高精度移液器及一次性吸头:0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl 3. 洗板机 4. 37℃孵育箱 5. 超纯水,去离子水 6. 一次性稀释用聚丙烯试管
三.样本收集及储存
1. 细胞培养上清: 将细胞培养基移至无菌离心管,在 4℃条件下 1000 ×g 离心 10 min,然后将上清等量分装于小 EP 管并 于-20℃下保存(24 小时内检测可放入 2-8℃储存),避免反复冻融。 2. 血清样本: 室温血液自然凝固 20 min 后,在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min,然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小时内检测可放入 2-8℃储存),保存过程中如有沉淀,请再次离心,避免反复冻融。 3. 血浆样本: 将全血收集到含抗血凝剂的管中,根据标本的实际要求选择 EDTA,柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混 合 20 min,在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min,然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小时内检测可放入 2-8℃储存),避免反复冻融。 4. 需要注意的是:血清血浆样本避免使用溶血、高血脂样本,以免影响检测结果;如果样本中的靶标物检测浓度高 于标准品的最高值,请将样品做适当倍数稀释后检测,建议正式实验前做预实验以确定稀释倍数。
四.人白细胞介素6ELISA试剂盒的准备工作 1. 试剂回温:首先在实验前 30 min 将试剂盒,待测样本放置于室温下复温。 2. 配制洗涤液:预先计算好稀释后的洗涤液使用体积,然后用超纯水或去离子水将 20 倍浓缩洗涤液稀释 成 1 倍应用液,未用完的浓缩洗涤液放入 4℃冰箱保存。 3. 标准品梯度稀释:在标准品中加入1ml标准品稀释液至完全溶解,按照浓度为350pg/ml、175pg/ml、87.5pg/ml、43.75pg/ml、21.88pg/ml、10.94pg/ml、5.47pg/ml进行等比稀释,具体操作如下图所示。
五.人白细胞介素6ELISA试剂盒检测步骤
1 按照实验设计,在标准品与样本孔中加样100ul,空白对照不加
2 25℃避光孵育2h 3 弃去液体,用洗涤液清洗4次,每次每孔至少加洗涤液300ul,洗完后吸水纸上拍干 4 加入酶标抗体溶液100ul,空白对照不加,25℃避光孵育1h 5 同步骤3 6 每孔加入底物A、B各50ul,25℃避光孵育20min,显色浅可适当延长孵育时间 7 加入终止液50ul,10min内在450nm波长处测OD值
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