上海原鑫生物科技从事科研试剂的优质企业。该文章详细的介绍了人白细胞介素6elisa试剂盒的检测步骤、结果判定、参数和常见问题及解决办法这四个方面。本文仅供于科研研究，不得用于临床试验！ 九、检测步骤 1 按照实验设计，在标准品与样本孔中加样100ul，空白对照不加 2 25℃避光孵育2h 3 弃去液体，用洗涤液清洗4次，每次每孔至少加洗涤液300ul，洗完后吸水纸上拍干 4 加入酶标抗体溶液100ul，空白对照不加，25℃避光孵育1h 5 同步骤3 6 每孔加入底物A、B各50ul，25℃避光孵育20min，显色浅可适当延长孵育时间 7 加入终止液50ul，10min内在450nm波长处测OD值
十、结果判断 1.用酶标仪 450 nm 波长测定 OD 值。 2.计算标准品、样品的平均 OD 值：每个标准品和标本的 OD 值应减去零孔的 OD 值 3.以标准品浓度为横坐标，吸光度OD值为纵坐标，用软件绘制标准曲线，样品中IL-6含量可通过对应OD 值由标准曲线换算出相应的浓度。 4. 若标本 OD 值高于标准曲线上限，应做适当稀释后重新检测，计算浓度时再乘以稀释倍数。
十一、参数表征 1.数据及标准曲线
| Concentration(pg/ml) | OD1 | OD2 | 空白 | 0 | 0 | 0 | S1 | 5.47 | 0.153 | 0.135 | S2 | 10.94 | 0.204 | 0.211 | S3 | 21.88 | 0.296 | 0.301 | S4 | 43.75 | 0.462 | 0.485 | S5 | 87.5 | 0.787 | 0.775 | S6 | 175 | 1.358 | 1.350 | S7 | 350 | 2.153 | 2.172 |
2. 准确度：标准品线性回归与预期浓度相关系数R>0.95 1. 检测范围：5.47-350pg/ml(如超出检测范围，需将样本稀释后检测) 2. 灵敏度：≤5.47pg/ml 4 特异性：不与其他可溶性结构类似物交叉反应 5 重复性：变异系数≤15% 6 储存条件：2-8℃冷藏 7 有效期：6个月
十二、常见问题及解决办法
问题 | 可能原因 | 解决方法 | 高背景或阴性 | 洗板不充分 | 将洗涤液注入反应孔充分洗涤，彻底拍干孔中液体 | 酶结合物过量 | 检查酶稀释度，按说明书标识的稀释度稀释 | 底物污染 | 加底物前检查底物是否为透明无色，请勿用变蓝的底物，重新用新的底物试验 | 阴性对照孔被阳性对照污染 | 注意洗涤时不要把洗液溢出孔外，不使阴阳对照孔液体涟接一起 | 不同批次试剂混用 | 检查试剂批号，请勿用不同批次试剂 | 显色信号弱 | 试剂过期 | 检查试剂盒有效期，请勿用过期试剂 | 孵育时间过短 | 按说明书中规定的时间孵育 | 试剂污染 | 检查试剂是否污染，请勿用污染的试剂 | 酶标仪滤光片不匹配 | 检查酶标仪设置及滤光片是否匹配 | 试剂盒平衡不充分 | 确保试剂盒试验前平衡至室温 | 显色时间不够 | 增加底物显色时间 | 无显色信号 | 检测抗体、酶、或显色剂漏加 | 检查试验操作流程，重复试验 | 酶被叠氮钠污染 | 请使用重新配制的试剂 | 试剂添加顺序有误 | 检查复核试验添加顺序、流程，重复试验 | 标曲佳但样品孔无信号 | 样品中靶标物含量低或样品中无靶标物 | 设置阳性对照，重复实验 | 样品基质效应影响检测 | 重新稀释样品后复测 | 标曲佳但样品信号偏高 | 样品中待检物含量超过标准曲线范围 | 重新稀释样品后复测 | 边缘效应 | 孵育温度不均衡 | 孵育时每步均使用新的封板胶纸，避免在环境温度变化大的地方孵育，勿叠放反应板 |
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