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植物中脂氧合酶(LOX)活性检测试剂盒
植物中脂氧合酶(LOX)活性检测试剂盒
品牌:原鑫生物
货号:AUKT-85559
规格:70T/50S
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植物中脂氧合酶(LOX)活性检测试剂盒

Plant Lipoxidase (LOX) Activity Assay Kit

 

一、产品描述

脂氧合酶(LOX)是一种广泛存在于植物中含非血红素铁的氧化还原酶,作为植物十八碳酸代谢 途径的关键酶,能够专一性催化多元不饱和脂肪酸的加氧反应,生成具有共轭双键的过氧化氢物,直 接或间接参与植物的生长、发育、成熟和衰老的调控过程,对植物生长发育及对环境胁迫的反应具有 重要的影响。

脂氧合酶能够催化亚油酸氧化,产物在 234 nm 处具有特征吸收峰,通过吸光值的变化速率即可 表征脂氧合酶的活性。


二、产品内容

植物中脂氧合酶(LOX)活性检测试剂盒图1 

注:试剂二瓶内含棕色离心管,取 0.5 mL 试剂一将离心管中固体充分溶解后洗入棕色瓶中即可。


三、产品使用说明 

测定过程中所需要的仪器和试剂:紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿(光径 10 mm)、研钵/匀 浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。 

1.植物中脂氧合酶(LOX)的提取(可根据预实验结果适当调整样本量及比例) 

按照样本质量(g):提取液体积(mL)为 1:(5-10)的比例(建议称取 0.1 g 组织,加入 1 mL 提取液)处理样品,冰浴研磨至匀浆(或将样本使用液氮研磨后加入提取液混合均匀),4℃ 15000 g 离心 20 min,取上清即为粗酶液,置于冰上待测。


2. 测定步骤 

①紫外分光光度计预热 30 min 以上,调节波长至 234 nm,蒸馏水调零。

②试验前将试剂一 25℃预热 30 min 以上。

③在 1 mL 石英比色皿中依次加入下列试剂:

试剂盒图2植物中脂氧合酶(LOX)活性检测试剂盒 

吸光值测定:①迅速混匀并开始计时,测定 15 s 时 234 nm 处吸光值,记为 A1 测定和 A1 空白; ②测定 75 s 时 234 nm 处吸光值,记为 A2 测定和 A2 空白;③计算∆A 测定=A2 测定-A1 测定,∆A 空 白=A2 空白-A1 空白,∆A=∆A 测定-∆A 空白。注:空白组只需测定 1-2 次。


3.脂氧合酶(LOX)活性计算

植物中脂氧合酶(LOX)活性检测试剂盒图3 

注释V 样:反应体系中加入粗酶液的体积,0.1 mL;V 样总:粗酶液总体积,1 mL;V 反总: 反应体系总体积,1 mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样品质量,g;T:反应时间,60 s=1 min; ∆A=∆A 测定-∆A 空白。


四、注意事项 

①提取和测定过程均需在冰上进行以免酶失活,粗酶液制备完成后需当日完成测定;

②本方法采用速率法测定酶活:准确在规定时间点完成吸光值测定,以保证实验结果的准确性;

③若 A2 测定>2.5 或∆A>1.2,建议将粗酶液使用试剂一稀释后再进行测定,计算时相应修改;

④为保证结果准确且避免试剂损失,测定前请仔细阅读说明书(以实际收到说明书内容为准), 确认试剂储存和准备是否充分,操作步骤是否清楚,且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定, 过程中问题请您及时与工作人员联系。


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