人睾酮(T)ELISA试剂盒使用方法

      上海原鑫生物科技有限公司生产的，人睾酮(T)ELISA试剂盒是一种用于定量测定人血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中睾酮含量的重要工具。该试剂盒基于酶联免疫吸附法（ELISA）原理，

通过特定的抗体抗原反应及酶促显色反应，实现对睾酮浓度的精确测量。以下是详细的使用方法步骤，旨在帮助用户准确、高效地完成检测过程。

 一、试剂盒组成及保存

本试剂盒通常包含以下主要组件：

 96孔板（预包被）：用于固定抗原，进行免疫反应。

 标准品：一系列已知浓度的睾酮标准溶液，用于绘制标准曲线。

 检测溶液A和B：分别为酶结合物和显色底物，参与免疫反应及显色反应。

 TMB底物：辣根过氧化物酶（HRP）的底物，用于显色。

 终止液：用于终止显色反应，使颜色稳定。

 浓洗涤液：用于洗涤去除未结合的成分。

 使用说明书：提供详细的操作步骤和注意事项。

试剂盒应存放在推荐的温度条件下，未开封的试剂盒可在4℃保存一周，长期保存应置于20℃。使用后的剩余试剂应按标签所示温度继续保存，开封后的酶标板需加干燥剂后密封保存于20℃，避免潮湿。

 二、样本采集与处理

1. 血清：室温下血液自然凝固1020分钟后，以20003000转/分的速度离心20分钟左右，收集上清液。若需长期保存，可置于20℃或80℃，但需避免反复冻融。

2. 血浆：根据标本要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合1020分钟后，同样以20003000转/分的速度离心20分钟，收集上清液。

3. 其他生物液体（如尿液、细胞培养上清、胸腹水、脑脊液等）：根据具体要求进行收集和处理，一般需离心去除杂质后取上清液进行检测。

 三、操作步骤

1. 试剂准备：将试剂盒内各试剂置于室温（1825℃）平衡30分钟。浓洗涤液按1:20的比例用蒸馏水稀释备用。标准品用蒸馏水溶解至指定浓度。

2. 加样：在酶标板上设置标准品孔和样本孔。标准品孔加入不同浓度的标准品溶液各50μL；样本孔先加入40μL样品稀释液，再加入10μL待测样本，使样本终稀释度为5倍。注意避免触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后，置于37℃恒温箱中温育60分钟，使抗原与抗体充分反应。

4. 洗涤：揭掉封板膜，弃去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干残留液体。

5. 显色：每孔依次加入显色剂A和B各50μL，轻轻震荡混匀，置于37℃避光显色15分钟。

6. 终止：每孔加入50μL终止液，终止显色反应，此时蓝色立即转变为黄色。

7. 测定：使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟内完成，以空白孔调零。

 四、数据处理

1. 标准曲线绘制：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。可采用线性回归法或双对数坐标法绘制平滑曲线。

2. 样品浓度计算：根据样品的OD值，在标准曲线上查找对应的浓度值，再乘以稀释倍数（本例中为5倍），即为样品的实际浓度。

 五、注意事项

1. 操作环境：实验室应保持整洁、干燥，避免灰尘和污染物。实验室内温度、湿度及温育条件应尽量保持一致。

2. 试剂使用：不同批号的试剂不可混用，避免交叉污染。加样时应使用一次性吸头，避免重复使用。

3. 结果判断：结果判断应在反应终止后10分钟内完成，以保证结果的准确性。

4. 样本保存：样本采集后应尽快处理，避免长时间放置导致降解。如需保存，应置于推荐的温度条件下，并避免反复冻融。

通过以上步骤，用户可以准确、高效地利用人睾酮(T)ELISA试剂盒完成睾酮