人百日咳毒素(PT)ELISAKit试剂盒/测试盒

详细信息  

货号：E-10577  

品牌：原鑫生物  

数量：大量  

供应商：上海原鑫生物科技有限公司  

检测限：6个月  

检测方法：酶联免疫法  

应用：仅用于科研  

适应物种：其它  

标记物：详询  

样本：其它  

规格：96T/48T  

详细说明书欢迎来电咨询!试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用  

目的：本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中ELISA的含量。实验原理：  

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被ELISA捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的ELISA呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。  

试剂盒组成：  

试剂盒组成48孔配置96孔配置备注微孔酶标板12孔*4条12孔*8条2-8℃保存标准品0.3ml*6管0.3ml*6管2-8℃保存样本稀释液6mL3mL2-8℃保存检测抗体-HRP10mL5mL2-8℃保存20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL2-8℃保存底物B6mL6mL2-8℃保存终止液6mL6mL2-8℃保存封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无。  

样本处理及要求：  

1.血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。  

2.血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。  

3.组织匀浆：用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。  

推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。  

4.细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。  

注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。  

操作步骤：  

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。  

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；  

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。  

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。  

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸  

水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。  

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。  

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。  

注意事项：  

1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。  

2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。  

3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。  

4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。  

5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。  

6.在储存和温育时避免强光直接照射。  

7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。  

8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。  

9.不能使用过期产品。10.如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。  

需要而未提供的试剂和器材：  

1.酶标仪（450nm）。  

2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱4.蒸馏水或去离子水。  

试剂准备：试剂盒  

从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。  

实验结果计算：以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。  

试剂盒性能：  

1.检测范围：15pg/mL–480pg/mL。  

2.灵敏度：最低检测浓度小于1.0pg/mL。  

3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。  

4.重复性：板内变异系数小于10%，板间变异系数小于15%。  

研发、生产科研产品：  

ELISA试剂盒：多种属、1000多种指标：人、大小鼠、通用、牛、兔、山羊、仓鼠、猪、马、鸡、犬、豚鼠、猴、绵羊  

抗体：兔多抗、鼠单抗种类丰富，一抗1万余种，二抗100多种；  

重组蛋白：多项发明专利，原核表达系统稳定表达蛋白1000余种。  

在线联系：（周经理） 17621047120QQ：2441609688（任经理）  

官方电话： 400-788-2680  

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