人莱姆IgG(Lyme-IgG)ELISA Kit试剂盒/测试盒

   详细信息

    货号：YX-131856

    品牌：原鑫生物

    供应商：上海原鑫生物科技有限公司

    检测限：1pg/mol

    检测方法：酶联免疫法/双抗夹心法

    样本：血清，血浆，细胞，组织，体液等

    规格：48T/96T

    产品优势：上海原鑫生物的试剂盒吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体，适用多种标本类型并节约成本。其高效、灵敏、特异的抗体与高效、灵敏、特异的抗体使实验曲线更完美。是一款可以让您放心选购的ELISA试剂盒产品。

    检测范围：7pg/ml-220pg/ml

    使用目的：本试剂盒用于测定山羊血清、血浆及相关液体样本中小反刍兽疫抗体(PPRAb)含量。

    实验原理

    本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中山羊小反刍兽疫抗体(PPRAb)水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入小反刍兽疫抗体(PPRAb)，再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小反刍兽疫抗体(PPRAb)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中山羊小反刍兽疫抗体(PPRAb)浓度。仪器、原料和试剂仪器聚苯乙烯96孔酶标板、微量移液管、酶联免疫阅读仪、洗板仪。

    标本要求

    1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

    马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

    2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

    试剂及试剂配制

    1.抗原及酶标记抗体

    ①抗原：IgG

    ②酶标抗抗体：羊抗鼠IgG-HRP

    2.包被液（CBS）：Na2CO30.8g，NaHCO31.46g，水溶解，定容500ml。

    3.封闭液（3％BSA+CBS或5％牛奶+CBS）：含3％牛血清白蛋白（BSA）：10mLCBS中加入0.3gBSA。含5％荷兰牛奶：10mLCBS中加入0.5g牛奶。

    4.洗涤液（PBST10*）：KH2PO44g，Na2HPO4·12H2O58g，NaCl160g，KCl4g，Tween-2010mL加水定容2L。

    5.洗涤液(1*PBS)：PBST：H2O=1：9

    6.底物溶液（4甲基酰苯氨）①TMB底物缓冲液(0.005mol/LPH3.6醋酸钠-柠檬酸缓冲液)：称NaAc·3H2O：1.13g，C6H8O7·H2O：1.05g，用蒸馏水溶解，定容至1000mL，调PH=3.6。②TMB底物液：称3,3＇,5,5＇-四甲基联苯胺（TMB）0.08g溶于40mL二甲基亚砜（DMSO）中，加60mL甲醇，混匀，加100mL底物缓冲液，在暗处避光搅拌2小时至溶解，4℃避光保存。③H2O2底物液：取140μL过氧化氢（H2O2）加入200mL底物缓冲液混匀。④底物应用液：现用现配，TMB:H2O2=1:1混匀。

    7.终止液：2mol/LH2SO4

    四、操作步骤

    ①抗原包被过夜（12h以上）：IgG抗原，用包被液（CBS）稀释，100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反应板中。4℃放置过夜。

    抗原用量：0.1μg*100N/抗原浓度（N为板数）

    ②封闭：弃上清加300μL/孔封闭液，37℃放置2h。

    ③洗涤：用洗涤液洗3次

    ④加一抗(待测样品为细胞培养上清)：将含单克降抗体的细胞培养上清100μL/孔加到已包被的板上，空白培养基作为阴性对照，已知样品血清（1：200稀释于1%BSA+PBST中）作为阳性对照。37℃恒温箱温育2h。测免疫效价待测样品为小鼠血清时：采小鼠血液于常温20min左右后放4℃至析出血清，3000r10min离心。将含抗体的血清在已包被的板上用1%BSA+PBST连续倍比稀释(按照1：200开始)，100μL/孔。每个样品平行做两份，小鼠阴性血清或空白培养基作为阴性对照，已知样品作为阳性对照。37℃恒温箱温育2h。

    ⑤洗涤：用洗涤液洗5次。

    ⑥加二抗（酶标抗抗体）：羊抗鼠IgG-HRP，用1%BSA+PBSTl：10000稀释，100μL／孔，37℃恒温箱温育1h。

    ⑦洗涤：用洗涤液洗5次，

    ⑧显色：加新鲜配制的底物溶液(TMB:H2O2=1:1)100μL/孔，37℃恒温箱放置10min，显示蓝色。

    ⑨终止反应、比色：加30μL/孔H2SO4终止液．颜色变黄；用酶标仪测定450nm630nm处各孔的吸光值，阳性反应的最大稀释度为待测样品的效价。

   研发、生产科研产品：

    ELISA试剂盒：多种属、1000多种指标：人、大小鼠、通用、牛、兔、山羊、仓鼠、猪、马、鸡、犬、豚鼠、猴、绵羊

    抗体：兔多抗、鼠单抗种类丰富，一抗1万余种，二抗100多种；

    重组蛋白：多项发明专利，原核表达系统稳定表达蛋白1000余种。

    在线联系：（周经理） 17621047120QQ：2441609688（任经理）

    官方电话： 400-788-2680

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