蔗糖合成酶（SS）活性检测试剂盒

Sucrose Synthase (SS) Activity Assay Kit

一、蔗糖合成酶（SS）活性检测试剂盒产品描述 

蔗糖不仅是重要的光合产物，也是植物体内运输的主要物质、碳水化合物的贮存形式之一。蔗糖 合成酶（Sucrose Synthase，SS）是植物糖代谢过程的关键酶，负责催化蔗糖合成与分解的可逆反应， 其合成活性可催化植物体内游离果糖和葡萄糖生成蔗糖。

蔗糖合成酶催化游离果糖与葡萄糖供体 UDPG 反应生成蔗糖，蔗糖与间苯二酚反应生成有色物 质，产物在 480 nm 处具有特征吸收峰，通过吸光值变化即可表征蔗糖合成酶的活性。

二、蔗糖合成酶（SS）活性检测试剂盒产品使用说明

测定过程中所需要的仪器和试剂：可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、可调式移 液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。

1.粗酶液的制备（可根据预实验结果适当调整样本量及比例） 

按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1：（5-10）的比例（建议称取 0.1 g 组织，加入 1 mL 提取液）处理样品，冰浴匀浆，4℃ 8000 g 离心 10 min，取上清即为粗酶液，置于冰上待测。

2.测定步骤

①分光光度计预热 30 min 以上，调节波长至 480 nm，蒸馏水调零。

②灭活粗酶液的制备：取适量粗酶液沸水浴处理 5-10 min（密封以防止水分散失），冷却至室温 后即为灭活粗酶液，可将待测粗酶液统一进行处理。

③在离心管中依次加入下列试剂：

充分混匀，25℃准确反应 10 min

充分混匀，沸水浴处理 10 min（密封以防止水分散失）

冰水浴迅速冷却至室温

吸光值测定（30 min 内完成测定）：取 1 mL 反应液至 1 mL 玻璃比色皿中，测定 480 nm 处吸光 值，记为 A 测定、A 对照、A 标准和 A 空白，计算∆A 测定=A 测定-A 对照，∆A 标准=A 标准-A 空 白。注：空白管只需测定 1-2 次，每个测定管均需设一个对照管。

标准曲线的建立：以 3.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.125 mg/mL 为横坐标（x），以其对应的∆A 标准 为纵坐标（y），绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将∆A 测定带入公式中得到 x（mg/mL）。

3.蔗糖合成酶（SS）活性计算 

①按组织蛋白浓度计算

单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 µg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

②按组织样本质量计算

单位定义：每 g 组织每分钟催化产生 1 µg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

注释：V 样：反应体系中加入粗酶液的体积，0.03 mL；V 提：粗酶液总体积，1 mL；Cpr：样本 蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，10 min。

三、蔗糖合成酶（SS）活性检测试剂盒注意事项 

①若测定吸光值超出标准线性吸光值范围：高于最高值建议将粗酶液适当稀释后再进行测定；低 于最低值建议适当增加样本量重新制备粗酶液后再进行测定，计算时相应修改；

②显色完成后应在 30 min 内完成测定； ③为保证结果准确且避免试剂损失，测定前请仔细阅读说明书（以实际收到说明书内容为准）， 确认试剂储存和准备是否充分，操作步骤是否清楚，且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定， 过程中问题请您及时与上海原鑫生物科技工作人员联系。

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