植物中脂氧合酶（LOX）活性检测试剂盒

Plant Lipoxidase (LOX) Activity Assay Kit

一、产品描述

脂氧合酶（LOX）是一种广泛存在于植物中含非血红素铁的氧化还原酶，作为植物十八碳酸代谢 途径的关键酶，能够专一性催化多元不饱和脂肪酸的加氧反应，生成具有共轭双键的过氧化氢物，直 接或间接参与植物的生长、发育、成熟和衰老的调控过程，对植物生长发育及对环境胁迫的反应具有 重要的影响。

脂氧合酶能够催化亚油酸氧化，产物在 234 nm 处具有特征吸收峰，通过吸光值的变化速率即可 表征脂氧合酶的活性。

二、产品内容

注：试剂二瓶内含棕色离心管，取 0.5 mL 试剂一将离心管中固体充分溶解后洗入棕色瓶中即可。

三、产品使用说明 

测定过程中所需要的仪器和试剂：紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿（光径 10 mm）、研钵/匀 浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。 

1.植物中脂氧合酶（LOX）的提取（可根据预实验结果适当调整样本量及比例） 

按照样本质量（g）：提取液体积（mL）为 1：（5-10）的比例（建议称取 0.1 g 组织，加入 1 mL 提取液）处理样品，冰浴研磨至匀浆（或将样本使用液氮研磨后加入提取液混合均匀），4℃ 15000 g 离心 20 min，取上清即为粗酶液，置于冰上待测。

2. 测定步骤 

①紫外分光光度计预热 30 min 以上，调节波长至 234 nm，蒸馏水调零。

②试验前将试剂一 25℃预热 30 min 以上。

③在 1 mL 石英比色皿中依次加入下列试剂：

吸光值测定：①迅速混匀并开始计时，测定 15 s 时 234 nm 处吸光值，记为 A1 测定和 A1 空白； ②测定 75 s 时 234 nm 处吸光值，记为 A2 测定和 A2 空白；③计算∆A 测定=A2 测定-A1 测定，∆A 空 白=A2 空白-A1 空白，∆A=∆A 测定-∆A 空白。注：空白组只需测定 1-2 次。

3.脂氧合酶（LOX）活性计算

注释：V 样：反应体系中加入粗酶液的体积，0.1 mL；V 样总：粗酶液总体积，1 mL；V 反总： 反应体系总体积，1 mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，60 s=1 min； ∆A=∆A 测定-∆A 空白。

四、注意事项 

①提取和测定过程均需在冰上进行以免酶失活，粗酶液制备完成后需当日完成测定；

②本方法采用速率法测定酶活：准确在规定时间点完成吸光值测定，以保证实验结果的准确性；

③若 A2 测定＞2.5 或∆A＞1.2，建议将粗酶液使用试剂一稀释后再进行测定，计算时相应修改；

④为保证结果准确且避免试剂损失，测定前请仔细阅读说明书（以实际收到说明书内容为准）， 确认试剂储存和准备是否充分，操作步骤是否清楚，且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定， 过程中问题请您及时与工作人员联系。

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