小鼠三磷酸腺苷(ATP)ELISA试剂盒 检测原理 小鼠三磷酸腺苷(ATP)ELISA试剂盒检测原理基于竞争法ELISA。该方法通过加入已知浓度的ATP酶标抗原和待测样本中的ATP,与固定在微孔板上的ATP特异性抗体进行竞争结合。样本中ATP浓度越高,则与抗体结合的酶标抗原越少,反之亦然。经过一系列洗涤步骤后,加入酶标二抗与酶标抗原结合,最后加入显色底物进行显色反应。显色程度与样本中ATP浓度成反比,通过测定吸光度值,可计算出样本中ATP的浓度。
检测步骤详解 1. 试剂准备:将试剂盒中的试剂按照说明书要求进行准备,包括酶标抗原、抗体、酶标二抗、显色底物等。 2. 样本处理:根据实验需要,对小鼠样本进行适当处理,如离心、稀释等,以去除干扰物质并调整样本浓度。 3. 加样:将处理好的样本和已知浓度的ATP酶标抗原分别加入微孔板中,每个样本设置多个复孔以保证结果的准确性。 4. 孵育:将微孔板置于恒温箱中,进行一定时间的孵育,使抗原与抗体充分结合。 5. 洗涤:孵育结束后,用洗涤液洗涤微孔板,去除未结合的抗原和抗体,以减少非特异性反应。 6. 加酶标二抗:洗涤后,向微孔板中加入酶标二抗,与酶标抗原结合形成抗原-抗体-酶标二抗复合物。 7. 再次孵育:将微孔板再次置于恒温箱中,进行一定时间的孵育,使酶标二抗与抗原-抗体复合物充分结合。 8. 洗涤:再次洗涤微孔板,去除未结合的酶标二抗。 9. 加显色底物:向微孔板中加入显色底物,与酶标二抗中的酶发生反应,产生颜色变化。 10. 终止反应:当颜色变化达到一定程度时,加入终止液终止显色反应。 11. 测定吸光度值:使用酶标仪测定微孔板中各孔的吸光度值,记录数据并进行分析。 |