小鼠神经调节蛋白4(NRG-4)elisa试剂盒

小鼠神经调节蛋白4(NRG-4)试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠NRG-4抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的小鼠NRG-4会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠NRG-4抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠NRG-4抗体与结合在包被抗体上的小鼠NRG-4结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，NRG-4浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中NRG-4的浓度。

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由于高脂肪和高糖饮食伴随着久坐不动的生活方式，糖尿病已成为全球流行病。文献发现表明 Nrg4 对治疗肥胖相关的代谢紊乱包括 2 型糖尿病 (T2D) 具有潜在的治疗作用。在我们的研究中使用了脂肪组织来源的 MSCs (ADSCs)，因为它们很丰富，并且可以通过微创手术收获。最后，我们的研究表明，ADSC 移植通过多种机制改善 HFD 喂养小鼠的葡萄糖耐量和代谢平衡，包括上调 GLUT4 表达和抑制炎症。更重要的是，我们的研究表明，鉴于 Nrg4 在减弱肝脏脂肪生成中的作用，Nrg4 过表达可以提高 ADSCs 在改善胰岛素抵抗 (IR) 和其他肥胖相关代谢紊乱方面的功效。

本研究的目的是评估间充质干细胞 (MSC) 中过度表达神经调节蛋白 4 (Nrg4)（一种已知可减弱肝脏脂肪生成的生长因子）是否可以增强其改善胰岛素抵抗 (IR) 和改善高血脂代谢的能力。脂肪饮食（HFD）喂养的小鼠。六周大的 C57BL/6 小鼠喂食 HFD 12 周，然后静脉移植脂肪组织来源的 MSCs (ADSCs) 或过表达 Nrg4 的 ADSCs (Nrg4-ADSCs)。在细胞注射后四和八周进行体重和血糖和胰岛素水平的评估以及葡萄糖耐量试验和胰岛素耐量试验。还测量了血浆和肝脏中的甘油三酯 (TG) 和总胆固醇 (TC) 水平。葡萄糖转运蛋白 4 (GLUT4)、白介素-6 (IL-6)、通过实时聚合酶链反应 (RT-PCR) 分析评估肌肉和脂肪组织中的肿瘤坏死因子-α (TNF-α) 和肿瘤坏死因子-α (TNF-α)。

分别通过 RT-PCR 和蛋白质印迹在 mRNA 和蛋白质水平评估与脂质代谢相关的基因的表达，包括甾醇调节元件结合蛋白-1c (SREBP-1c) 和脂肪酸合酶。接受 ADSC 或 Nrg4-ADSC 的 HFD 喂养小鼠显示出血糖水平降低和胰岛素敏感性增强，而 Nrg4-ADSC 组在这些方面表现出更大的改善。ADSC 或 Nrg4-ADSC 输注可部分逆转 HFD 诱导的骨骼肌和脂肪组织中 GLUT4、IL-6 和 TNF-α 表达的变化；然而，这两组之间没有观察到差异。与 ADSC 组相比，Nrg4-ADSC 处理的小鼠显示出较少的脂肪细胞沉积，血清和肝脏中的 TG 和 TC 水平降低，SREBP-1c 和脂肪酸合酶的表达降低。

ADSC 移植可降低血糖水平并改善 HFD 诱导的 IR。ADSC 的保护作用可归因于骨骼肌和脂肪组织中炎症的抑制和葡萄糖摄取的增加。更重要的是，ADSCs 中的 Nrg4 过表达可以通过减弱肝脏脂肪生成来增强这种功效。ADSC 的保护作用可归因于骨骼肌和脂肪组织中炎症的抑制和葡萄糖摄取的增加。更重要的是，ADSCs 中的 Nrg4 过表达可以通过减弱肝脏脂肪生成来增强这种功效。ADSC 的保护作用可归因于骨骼肌和脂肪组织中炎症的抑制和葡萄糖摄取的增加。更重要的是，ADSCs 中的 Nrg4 过表达可以通过减弱肝脏脂肪生成来增强这种功效。

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