细菌总蛋白提取试剂盒 品牌：原鑫生物 货号：YX-HU-74185 规格：48T/96T   立即购买

细菌总蛋白提取试剂盒

细菌总蛋白提取试剂盒操作步骤：

1.首先取0.5mL 10X细胞裂解缓冲液，用去离子水稀释至5mL 1X细胞裂解缓冲液。

2.以5000 xg离心10分钟，收集表达目的蛋白的细菌。重新移动培养基然后用1X PBS清洗颗粒。每100毫升细菌在4毫升1X细胞裂解缓冲液中重新悬浮细菌颗粒培养（OD600=1）。

3.添加40微升PMSF和80微升溶菌酶，将细菌悬浮液在37°C下培养30分钟。

4.在摇动平台上培养混合物10分钟。

5.添加20微升DNA酶/核糖核酸酶，继续在37°C下摇动培养10分钟。

6.通过在4°C下以3000 xg离心30分钟的方式去除不溶性碎屑。收集超级游泳液（细胞裂解）缓冲液）在新鲜管中。

7.取10μl 2X SDS凝胶负载缓冲液和10μl细胞裂解缓冲液，混合煮沸，分析20μl，测定提取物含量通过10%SDS-PAGE进行电泳。并将含有目标蛋白质的部分储存在-70°C或直接加载到净化柱上。

细菌总蛋白提取试剂盒注意事项：

1.可以添加蛋白酶抑制剂，但在使用Ni2时不要添加EDTA或其他螯合剂+螯合剂破坏了柱结合组氨酸标签的能力。

2.可能需要将上清液通过一个0.45μm的过滤器，以防止在试验过程中树脂堵塞净化后。

3.细菌细胞也可以通过超声波（3倍10秒）裂解某些蛋白质，但是，在超声波作用下，细胞会保持低温超声波治疗。

4.建议在提取后尽快使用提取的蛋白质。

5.溶解在异丙醇中的PMSF应在-20°C下储存。

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