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​单糖成分分析介绍

2025-06-06

单糖成分分析的主流检测方法总结,整合自当前研究与实践指南:


一、色谱分析法(主流技术)

高效液相色谱法(HPLC)‌

原理‌:基于单糖极性差异进行分离,常用氨基柱或糖专用柱(如SugarKS系列)。

衍生化必要性‌:

联用紫外/荧光检测器(如PMP衍生化)适用中性/酸性多糖,检出限低至μg/L;

联用示差折光(RID)、蒸发光散射(ELSD)等检测器无需衍生。

局限‌:果糖等非还原糖难以检测。


高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法(HPAEC-PAD)‌


优势‌:无需衍生化,直接分离单糖(含酸性糖、氨基糖),灵敏度高、前处理简单。

适用‌:复杂样品(如糖蛋白、植物多糖)的精确定量。


气相色谱法(GC)‌

流程‌:单糖需衍生化为挥发性衍生物(如硅烷化)后分析。

适用‌:中性单糖分析,分离度好;

局限‌:不适用糖醛酸及热不稳定单糖,衍生步骤繁琐。


薄层色谱法(TLC)‌

特点‌:操作简便、成本低,常用于初步定性;

局限‌:分离度低,重现性受温湿度影响大。


二、质谱与核磁共振技术

质谱联用技术‌

GC-MS‌:高分辨率定量,需衍生化;

LC-MS/MS‌:适用于衍生化单糖的痕量检测。


核磁共振(NMR)‌

原理‌:基于化学位移识别单糖结构(如¹H NMR、CSSF-TOCSY技术);

优势‌:无需水解/衍生化,可同时区分22种糖类;

局限‌:设备昂贵,需专业操作。


三、生化检测法

酶比色法(如GOD-POD)‌

适用‌:葡萄糖专项检测(如血糖分析),特异性强、干扰少。

还原糖滴定法(如费林试剂法)‌

原理‌:利用还原糖与铜离子的氧化还原反应;

注意‌:需严格控制温度、滴定速度。


四、关键流程与注意事项

步骤‌ ‌操作要点‌

样品前处理‌ 酸水解(HCl/TFA)释放单糖,需优化条件避免降解;多糖提取可选水提/醇沉法。

衍生化选择‌ PMP衍生化适用多数单糖,但果糖检测需换用其他方法;HPAEC-PAD无需衍生。

方法选择‌ 简单定性→TLC;高精度定量→HPAEC-PAD或HPLC-MS;快速筛查→酶法。


五、应用场景推荐

医药/质检‌:HPLC-PMP(稳定性好)或HPAEC-PAD(高效精准);

食品分析‌:酶比色法(快速)、GC-MS(挥发性糖);

科研解析‌:NMR(结构鉴定)、HPAEC-PAD(微量组分)。

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